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2021-08-16

CRISPR/Cas系統是原核生物的一種天然免疫系統，存在于大多數細菌和古生菌中。原核生物在遭到病毒入侵后，能夠把病毒DNA的一小段提取出來并存儲到自身基因組上的特定區域，我們把這個區域稱為CRISPR存儲空間。當再次遇到病毒入侵時，原核生物能夠根據存儲的DNA片段識別病毒，將病毒的DNA切斷而使之失效。目前應用*泛的CRISPR/Cas系統是來源于釀膿鏈球菌(Streptococcuspyogenes)的CRISPR/Cas9系統。天然的CRISPR-Cas9系統由三部分組...

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小動物活體成像技術

2021-08-13

分子成像的發展：1999年，美國哈佛大學Weissleder等人提出了分子影像學（molecularimaging）的概念——應用影像學方法，對活體狀態下的生物過程進行細胞和分子水平的定性和定量研究。傳統成像大多依賴于肉眼可見的身體、生理和代謝過程在疾病狀態下的變化，而不是了解疾病的特異性分子事件；分子成像則是利用特異性分子探針追蹤靶目標并成像。這種從非特異性成像到特異性成像的變化，為疾病生物學、疾病早期檢測、定性、評估和治療帶來了重大的影響。分子成像技術使活體動物體內成像成...

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質粒提取竅門

2021-08-12

提取質粒DNA的方法有很多種，從提取產量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為堿裂解法、煮沸法等，各種不同的方法各有其優缺點，根據不同的實驗目的可以采用合適的提取方法。堿裂解法：使用堿與SDS裂解法從E.coli（大腸桿菌）中分離制備質粒DNA已有30多年的歷史。將細菌懸浮液暴露于高pH值的強陰離子洗滌劑中，會使細胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質變性，將質粒DNA釋放到上清中。堿性溶劑使堿基配對*破壞，閉環...

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RNA免疫共沉淀技術

2021-08-12

RNA免疫共沉淀（RNAimmunoprecipitation，RIP）是一種基于抗體的技術，用于定位體內的RNA-蛋白質相互作用。將所關注的RNA結合蛋白(RBP)與其結合的RNA一起進行免疫沉淀，鑒定結合轉錄RNA（mRNA、非編碼RNA或病毒RNA），可以通過實時PCR、微陣列或測序檢測。表觀遺傳學和RNA生物學領域對不同RNA作用和功能的關注大大增加。據觀察，RNA的功能遠不止轉錄和后續的翻譯。例如，RNA-蛋白質相互作用能夠調控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA...

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細胞凋亡檢測

2021-08-11

細胞凋亡（apoptosis）指為維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。下面介紹幾種常用的檢測細胞凋亡的方法。一、TUNEL法脫氧核糖核苷酸衍生物digoxin在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了...

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細胞周期的分析

2021-08-11

細胞周期（cellcycle）是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。細胞分裂期又稱M期。細胞通過M期一分為二，有的可繼續分裂進行周期循環，有的轉入G0期。G0期是脫離細胞周期暫時停止分裂的一個階段。但在一定適宜刺激下，又可進入周期（圖1），合成DNA與分裂。G0期的特點為：在未受刺激的G0細胞，DNA合成與細胞分裂的潛力仍然存在；當G0細胞...

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蛋白磷酸化檢測的注意事項

2021-08-02

1、樣本準備過程中防止蛋白質降解和保留翻譯后修飾樣本準備過程中，細胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過程應在冰上進行，并預先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時，選擇所要檢測位點的磷酸化抗體至關重要。磷酸化都會使蛋白質的分子量增加80Da，檢查抗體是否檢測到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導磷酸化課題設計可能需要在收獲前刺激細胞，以確保蛋白質被磷酸化。例如，在...

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